细胞中的rna可以分为信使rna、转运rna和核糖体rna三大类，不同组织总rna提取的实质就是将细胞裂解，释放出rna，并通过不同方式去除蛋白，dna等杂质，最终获得高纯度rna产物的过程。
rna提取技术流程
细胞裂解
异硫氰酸胍/苯酚法（trizol）
这是一种传统的rna提取方法，适用于大部分动植物材料，但对于次生代谢产物较多的植物材料提取rna效果较差。
 该法应用非常广泛，适用于包括动物组织、微生物、培养细胞等在内的各类动物性材料，同时还适用于次生代谢物较少的植物性材料，如幼苗、幼叶等。该法主要应用在动物组织和培养细胞的rna提取中。
胍盐/β-巯基乙醇法
rna提取技术适用于各种不同动物材料和次生代谢物少的植物材料。
在这种方法中，胍盐使细胞充分裂解，β-巯基乙醇作为蛋白的变性剂在实验全程中可以抑制rnasea的活性，保护rna不被降解。
其它方法
有些植物材料多糖多酚含量较高，如植物果实，番茄的叶子等，有些植物木质化程度较高，如根茎等组织。针对这类材料本公司推出了一种全新的植物总rna提取试剂，该试剂特别适合于从富含多糖、多酚、淀粉的材料中提取纯度高、完整性好的总rna，有关的具体步骤将在分论中详细介绍，实验者可根据自己的需要进行选择。
1.样品处理
从各种不同来源样品（如细菌、酵母、血液、动物组织、植物组织和培养细胞）,或同一来源样品的不同组织（如植物幼嫩叶片、成熟根、茎等）中提取高质量的rna，因细胞结构及所含的成分不同，样品预处理的方式也各有差异。
样品的要求
z好使用新鲜的样品或取样后立即在低温（-20℃或-70℃）冷冻保存的样品，避免反复冻融，因为这会导致提取的rna降解和提取量下降。
样品预处理方式
植物材料-液氮研磨
动物材料-匀浆、液氮研磨
细菌-溶菌酶破壁
酵母-液氮研磨、玻璃珠处理、混合酶破壁
硅基质吸附法
随着实验方法的改进，现已发展出一种采用吸附材料纯化核酸的方法。目前较常见的有：硅基质吸附材料、阴离子交换树脂和磁珠等。硅基质吸附材料因其具有可特异吸附核酸，使用方便、快捷、不使用有毒溶剂如苯酚等优点，成为核酸纯化的s选。
rna提取技术纯化及获得
纯化要求
rna样品中不应存在对酶（如逆转录酶）有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子。避免其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染。排除dna分子的污染。
纯化方法及沉淀
方法一：有机溶剂抽提法
抽提
在使用rna提取试剂进行rna提取时，常使用进行抽提，以去除蔗糖、蛋白等杂质，并促进水相与有机相的分离，从而达到纯化rna的方法。在本公司的提取rna的产品中，与trizol同型试剂法及其衍生试剂盒。
沉淀
抽提rna后，一般采用了异丙醇或乙醇来沉淀水相rna。加入0.6倍水相体积的异丙醇或与水相等体积的异丙醇，室温沉淀20-30分钟，高速离心，可获得rna沉淀。
溶解沉淀
加入适量rnase-free ddh2o溶解rna沉淀。
纤维组织
心脏/骨骼肌等纤维组织提取rna的关键在于彻底破碎组织。这些组织细胞密度低，单位重量的组织中rna含量较低，建议增加起始量。此外，一定要在液氮中将组织彻底磨碎。
蛋白/脂肪含量较高的组织
脑或植物脂肪含量高，酚抽提后，上清含白色絮状物。必须用再次对上清进行抽提。
rna提取技术纯度检测---分光光度计法
通过od260/280来检测rna纯度，od260/230作为参考值。
od260/280在1.9-2.1之间，可以认为rna的纯度较好；
od260/280值小于1.8，则表明蛋白杂质较多；
od260/280值大于2.2，则表明rna已经降解；
od260/230值小于2.0，则表明裂解液中有异硫氰酸胍和β-巯基乙醇法残留。
注意：如果用te溶解或洗脱rna，会使od260/280值偏大。

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